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Facoltà di Scienze Matematiche Fisiche e Naturali >
Tesi di dottorato in scienze matematiche e fisiche >
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http://hdl.handle.net/2108/482
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Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
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| contributor.advisor | Blandino, Giovanni | - |
| contributor.author | Lapi, Eleonora | - |
| date.accessioned | 2008-05-13T11:31:08Z | - |
| date.available | 2008-05-13T11:31:08Z | - |
| date.issued | 2008-05-13T11:31:08Z | - |
| identifier.uri | http://hdl.handle.net/2108/482 | - |
| description | 19. ciclo | en |
| description.abstract | The p53 paralogues p73, p63 and their respective truncated isoforms have
been shown to be critical regulators of developmental and differentiation
processes. Indeed, both p73 and p63 deficient mice exhibit severe
developmental defects. Here, we show that the S100A2 gene, whose
transcript and protein are induced during keratinocyte differentiation of
HaCaT cells, is a direct transcriptional target of p73β and ΔNp63α and is
required for proper keratinocyte differentiation. Transactivation assays
reveal that p73β and ΔNp63α exert opposite transcriptional effects on the
S100A2 gene. While ΔNp63α is found in vivo onto S100A2 regulatory
regions predominantly in proliferating cells, p73β is recruited in
differentiating cells. Silencing of p73 impairs the induction of S100A2
during the differentiation of HaCaT cells. Moreover, silencing of p73 or
S100A2 impairs the proper expression of keratinocyte differentiation
markers. Of note, p53 family members do not trigger S100A2 gene
expression in response to apoptotic doses of cisplatin and doxorubicin.
The p53 family is also known to be involved in the transcriptional control of
growth arrest and apoptosis. Despite the recent identification of specific p73-
target genes by genome-wide expression profile techniques, p73-mediated
apoptosis occurs mostly through the activation of a set of genes that were
originally found to be activated by p53. This suggests that promoter
selectivity by both p53 and p73 might be the result of biochemical events
such as post-translational modifications and specific protein-protein
interactions.
The transcriptional coactivator Yes-associated protein (YAP) has been
demonstrated to interact with and to enhance p73-dependent apoptosis in
response to DNA damage. Here we show the existence of specific target
genes whose transcriptional activation during the apoptotic response requires
both p73 and YAP. In particular p73 and YAP are concomitantly recruited
onto the regulatory regions of the promyelocytic leukemia gene (PML); an
essential event for PML induction after cisplatin treatment. Moreover,
sequestring YAP into the cytoplasm by a constitutively active mutant of
AKT leads to a reduction of p300 recruitment onto the PML regulatory
regions which correlates with a reduction in histone acetylation and a
reduction in PML expression. Finally, we show that PML binds to YAP and
plays a role in the regulation of YAP half-life, preventing its ubiquitinylation
and subsequent degradation. | en |
| description.abstract | I due omologhi del gene p53, p73 e p63, con le loro rispettive isoforme troncate, svolgono un
ruolo fondamentale nella regolazione del differenziamento e dello sviluppo, come dimostrato dai
topi knock-out per i due geni che presentano severi difetti nello sviluppo. In questa tesi viene
mostrato che il gene S100A2, la cui trascrizione e traduzione sono indotte durante il
differenziamento cheratinocitario della linea cellulare HaCaT, e’ un target trascrizionale di p73β
e ΔNp63α ed e’ richiesto per la corretta esecuzione del programma differenziativo
cheratinocitario. Saggi di transattivazione rivelano che p73β e ΔNp63α esercitano effetti
trascrizionali opposti sul gene S100A2: infatti mentre ΔNp63α lega in vivo le regioni regolative
di S100A2 soprattutto in cellule proliferanti, inibendone la trascrizione, p73β e’ reclutato solo
durante il differenziamento e partecipa alla completa attivazione di S100A2 che si ha durante il
processo differenziativo stesso. Il silenziamento di p73 riduce l’induzione di S100A2 durante il
differenziamento delle HaCaT; inoltre il silenziamento di p73 o di S100A2 riduce la corretta
espressione dei geni specifici del differenziamento cheratinocitario. S100A2 sembra essere un
target specifico della famiglia p53 all’interno del programma differenziativo cheratinocitario in
quanto non viene attivato in risposta a dosi apoptotiche di cisplatino e doxorubicina.
E’ ben noto che la famiglia p53 e’ anche coinvolta nel controllo trascrizionale dell’arresto del
ciclo cellulare e dell’apoptosi. Nonostante la recente identificazione di geni target specificamente
regolati da p73, l’apoptosi mediata da p73 avviene principalmente attraverso l’attivazione di un
gruppo di geni inizialmente identificati come target di p53. Questo suggerisce che sia per p53 che
per p73 la selettivita’ a livello di promotore possa essere il risultato di eventi biochimici come
modificazioni post-traduzionali e/o di specifiche interazioni proteina-proteina. E’ stato dimostrato
che il coattivatore trascrizionale Yes-associated protein (YAP) interagisce con p73 e incrementa
l’apoptosi mediata da p73 in risposta a danno al DNA. In questa tesi viene mostrata l’esistenza di
specifici geni la cui attivazione trascrizionale durante la risposta apoptotica richiede sia la
presenza di p73 che di YAP. In particolare p73 e YAP sono insieme reclutati sulle regioni
regolative del gene PML (promyelocytic leukemia), evento essenziale affinche’ PML venga
indotto in seguito a trattamento con cisplatino. Inoltre, sequestrando YAP nel citoplasma con un
mutante costitutivamente attivo di AKT si ha una riduzione del legame di p300 con le regioni
regolative di PML, che porta ad una riduzione nell’acetilazione degli istoni e ad una riduzione
dell’espressione stessa di PML. Infine viene mostrato che PML lega YAP e svolge un ruolo nella
regolazione dell’emivita di YAP, prevenedo la sua ubiquitinazione e conseguente degradazione. | en |
| format.extent | 2766620 bytes | - |
| format.mimetype | application/pdf | - |
| language.iso | en | en |
| subject | p73 | en |
| subject | p63 | en |
| subject | YAP | en |
| subject | S100A2 | en |
| subject | PML | en |
| subject | differentiation | en |
| subject | apoptosis | en |
| title | Identification of novel and direct target genes of p73 | en |
| type | Doctoral thesis | en |
| degree.name | Dottorato in biologia molecolare e cellulare | en |
| degree.level | Dottorato | en |
| degree.discipline | Facoltà di Scienze Matematiche Fisiche e Naturali | en |
| degree.grantor | Università degli studi di Roma Tor Vergata | en |
| date.dateofdefense | A.A. 2006/2007 | en |
| Appears in Collections: | Tesi di dottorato in scienze matematiche e fisiche
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| E. Lapi PhD Thesis.pdf | | 2701Kb | Adobe PDF | View/Open |
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