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Tesi di dottorato in scienze matematiche e fisiche >

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/2108/482

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contributor.advisorBlandino, Giovanni-
contributor.authorLapi, Eleonora-
date.accessioned2008-05-13T11:31:08Z-
date.available2008-05-13T11:31:08Z-
date.issued2008-05-13T11:31:08Z-
identifier.urihttp://hdl.handle.net/2108/482-
description19. cicloen
description.abstractThe p53 paralogues p73, p63 and their respective truncated isoforms have been shown to be critical regulators of developmental and differentiation processes. Indeed, both p73 and p63 deficient mice exhibit severe developmental defects. Here, we show that the S100A2 gene, whose transcript and protein are induced during keratinocyte differentiation of HaCaT cells, is a direct transcriptional target of p73β and ΔNp63α and is required for proper keratinocyte differentiation. Transactivation assays reveal that p73β and ΔNp63α exert opposite transcriptional effects on the S100A2 gene. While ΔNp63α is found in vivo onto S100A2 regulatory regions predominantly in proliferating cells, p73β is recruited in differentiating cells. Silencing of p73 impairs the induction of S100A2 during the differentiation of HaCaT cells. Moreover, silencing of p73 or S100A2 impairs the proper expression of keratinocyte differentiation markers. Of note, p53 family members do not trigger S100A2 gene expression in response to apoptotic doses of cisplatin and doxorubicin. The p53 family is also known to be involved in the transcriptional control of growth arrest and apoptosis. Despite the recent identification of specific p73- target genes by genome-wide expression profile techniques, p73-mediated apoptosis occurs mostly through the activation of a set of genes that were originally found to be activated by p53. This suggests that promoter selectivity by both p53 and p73 might be the result of biochemical events such as post-translational modifications and specific protein-protein interactions. The transcriptional coactivator Yes-associated protein (YAP) has been demonstrated to interact with and to enhance p73-dependent apoptosis in response to DNA damage. Here we show the existence of specific target genes whose transcriptional activation during the apoptotic response requires both p73 and YAP. In particular p73 and YAP are concomitantly recruited onto the regulatory regions of the promyelocytic leukemia gene (PML); an essential event for PML induction after cisplatin treatment. Moreover, sequestring YAP into the cytoplasm by a constitutively active mutant of AKT leads to a reduction of p300 recruitment onto the PML regulatory regions which correlates with a reduction in histone acetylation and a reduction in PML expression. Finally, we show that PML binds to YAP and plays a role in the regulation of YAP half-life, preventing its ubiquitinylation and subsequent degradation.en
description.abstractI due omologhi del gene p53, p73 e p63, con le loro rispettive isoforme troncate, svolgono un ruolo fondamentale nella regolazione del differenziamento e dello sviluppo, come dimostrato dai topi knock-out per i due geni che presentano severi difetti nello sviluppo. In questa tesi viene mostrato che il gene S100A2, la cui trascrizione e traduzione sono indotte durante il differenziamento cheratinocitario della linea cellulare HaCaT, e’ un target trascrizionale di p73β e ΔNp63α ed e’ richiesto per la corretta esecuzione del programma differenziativo cheratinocitario. Saggi di transattivazione rivelano che p73β e ΔNp63α esercitano effetti trascrizionali opposti sul gene S100A2: infatti mentre ΔNp63α lega in vivo le regioni regolative di S100A2 soprattutto in cellule proliferanti, inibendone la trascrizione, p73β e’ reclutato solo durante il differenziamento e partecipa alla completa attivazione di S100A2 che si ha durante il processo differenziativo stesso. Il silenziamento di p73 riduce l’induzione di S100A2 durante il differenziamento delle HaCaT; inoltre il silenziamento di p73 o di S100A2 riduce la corretta espressione dei geni specifici del differenziamento cheratinocitario. S100A2 sembra essere un target specifico della famiglia p53 all’interno del programma differenziativo cheratinocitario in quanto non viene attivato in risposta a dosi apoptotiche di cisplatino e doxorubicina. E’ ben noto che la famiglia p53 e’ anche coinvolta nel controllo trascrizionale dell’arresto del ciclo cellulare e dell’apoptosi. Nonostante la recente identificazione di geni target specificamente regolati da p73, l’apoptosi mediata da p73 avviene principalmente attraverso l’attivazione di un gruppo di geni inizialmente identificati come target di p53. Questo suggerisce che sia per p53 che per p73 la selettivita’ a livello di promotore possa essere il risultato di eventi biochimici come modificazioni post-traduzionali e/o di specifiche interazioni proteina-proteina. E’ stato dimostrato che il coattivatore trascrizionale Yes-associated protein (YAP) interagisce con p73 e incrementa l’apoptosi mediata da p73 in risposta a danno al DNA. In questa tesi viene mostrata l’esistenza di specifici geni la cui attivazione trascrizionale durante la risposta apoptotica richiede sia la presenza di p73 che di YAP. In particolare p73 e YAP sono insieme reclutati sulle regioni regolative del gene PML (promyelocytic leukemia), evento essenziale affinche’ PML venga indotto in seguito a trattamento con cisplatino. Inoltre, sequestrando YAP nel citoplasma con un mutante costitutivamente attivo di AKT si ha una riduzione del legame di p300 con le regioni regolative di PML, che porta ad una riduzione nell’acetilazione degli istoni e ad una riduzione dell’espressione stessa di PML. Infine viene mostrato che PML lega YAP e svolge un ruolo nella regolazione dell’emivita di YAP, prevenedo la sua ubiquitinazione e conseguente degradazione.en
format.extent2766620 bytes-
format.mimetypeapplication/pdf-
language.isoenen
subjectp73en
subjectp63en
subjectYAPen
subjectS100A2en
subjectPMLen
subjectdifferentiationen
subjectapoptosisen
titleIdentification of novel and direct target genes of p73en
typeDoctoral thesisen
degree.nameDottorato in biologia molecolare e cellulareen
degree.levelDottoratoen
degree.disciplineFacoltà di Scienze Matematiche Fisiche e Naturalien
degree.grantorUniversità degli studi di Roma Tor Vergataen
date.dateofdefenseA.A. 2006/2007en
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