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Facoltà di Medicina e Chirurgia >
Tesi di dottorato in medicina >
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http://hdl.handle.net/2108/1095
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Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
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| contributor.advisor | Baiocchi, Leonardo | - |
| contributor.author | Almerighi, Cristiana | - |
| date.accessioned | 2009-09-03T10:56:44Z | - |
| date.available | 2009-09-03T10:56:44Z | - |
| date.issued | 2009-09-03T10:56:44Z | - |
| identifier.uri | http://hdl.handle.net/2108/1095 | - |
| description | 21. ciclo | en |
| description.abstract | Introduzione.
La forma attiva della vitamina D3, 1,25(OH)2D3, oltre alla classica funzione sulla mineralizzazione ossea svolge un’azione immunomodulatoria indirettamente dimostrata dalla presenza del recettore della Vitamina D (Vitamin D receptor, VDR) nel timo umano e nei leucociti periferici e dai disordini immunitari in animali e pazienti con deficit di vitamina D. 1,25(OH)2D3 produce: 1) Inibizione della maturazione delle CD attraverso un meccanismo VDR-dipendente; 2) Riduzione dell’espressione delle MHC di classe II, di CD80, CD86, CD40, CD1a e CD83; 3) Potente inibizione delle risposte di tipo Th1; 4) Emergenza di un predominante fenotipo Th2; 5) Inibizione produzione di IFN-g; 6) Inibizione di produzione di immunoglobuline IgM e IgG.
Scopo dello studio.
Sulla base di queste premesse si è concretizzato il progetto di ricerca sulla 1,25(OH)2D3 che si è svolto seguendo tappe successive: Parte prima. Effetto della 1,25(OH)2D3 sulla funzione dei monociti di soggetti sani, in particolare sulla capacità di inibire l’attività pro-infiammatoria CD40L-mediata. Parte seconda. Effetto della 1,25(OH)2D3 sulla capacità proliferativa e sulla produzione di citochine da parte dei linfociti di soggetti trapiantati per cirrosi epatica HCV-positiva. Parte terza. Studio degli effetti clinici prodotti dalla supplementazione con 1,25(OH)2D3 in soggetti affetti da epatopatia cronica da virus C.
Materiali e metodi.
Pazienti. Parte prima. Dodici donatori sono stati inclusi nello studio. Parte seconda. Sedici pazienti trapiantati per cirrosi da virus C fra il 1995 e il 2004 presso il nostro Centro e 10 controlli sani sono stati arruolati nello studio. Parte terza. Sette pazienti di cui sei affette da epatite cronica da virus C e una con ricorrenza di malattia da virus C dopo trapianto di fegato sono state incluse nello studio. Cellule. Le cellule mononucleate da sangue periferico (PBMC) sono state separate mediante centrifugazione su gradiente di densità. I monocito-macrofagi sono stati successivamente purificati mediante centrifugazione contro-corrente. Le cellule T sono state isolate dalle PBMC attraverso un processo di selezione negativa usando biglie magnetiche. Le cellule sono state coltivate in RPMI con aggiunta di 1,25(OH)2D3 a concentrazioni comprese fra 0.001 e 10nM. Per la stimolazione è stato utilizzato CD40L trimerico solubile ricombinante, la PHA, il CD3/CD28 e la PMA/IO per gli esprimenti di citofluorimetria. La produzione intracellulare di citochine e l’espressione di membrana di CD3, CD4,CD40, CD86 e CD80 sono state valutate al citofluorimetro (FACS).
Risultati.
Parte prima. 1,25(OH)2D3 inibisce la risposta citochinica dei monociti CD40L-attivati, inibisce la produzione di TNF-α e IL-1β, riduce l’espressione delle molecole di superficie, nterferisce con l’abilità da parte del CD40L di indurre funzioni di costimolo. Parte seconda. 1,25(OH)2D3 inibisce la proliferazione linfocitaria T in modo dose-dipendente e la duzione di IFN-g e TNF-α nei pazienti trapiantati. Non sono state trovate correlazioni significative fra i livelli sierici di 25(OH)D e la risposta proliferativa T cellulare o la produzione citochinica PMA/IO indotta. Parte terza. La supplemetazione con 1,25(OH)2D3 produce una significativa riduzione dell’IFN-γ plasmatico nelle pazienti HCV positive.
Discussione.
1,25(OH)2D3 esplica un’azione immunomodulante di alcune importanti vie di attivazione immunitaria. Gli effetti sono dose-dipendenti. 1,25(OH)2D3 produce effetti nei linfociti T di pazienti trapiantati per cirrosi epatica da virus C. Questi effetti sono simili a quelli ottenuti nei controlli. I risultati preliminari ottenuti mediante supplementazione con 1,25(OH)2D3 nei pazienti HCV-positivi hanno mostrato alcuni dati incoraggianti. | en |
| description.abstract | Background.
In addition to the classical mineralizing action, the active form of Vitamin D3, 1,25(OH)2D3, has also an immunomodulatory function, as suggested by the presence of Vitamin D receptor (VDR)in human thymus and in peripheral leukocytes, and by the immune disorders in subjects with Vitamin D defects. 1,25(OH)2D3 leads to: 1) Inibition of dendritic cell maturation; 2) Reduction of the expression of MHC class II molecules, CD80, CD86, CD40, CD1a and CD83; 3) Powerful inhibition of type Th1 responses; 4) Predominance of Th2 phenotype; 5) Inhibition of IFN-g production; 6) Inhibition of IgM and IgG production.
Aims.
To study: First: the effect of 1,25(OH)2D3 on monocyte function, in particular on the inhibitory function on CD40L-mediated pro-inflammatory activity. Second: The effect of 1,25(OH)2D3 on proliferation and cytokine production of lymphocytes from HCV-positive transplanted patients. Third: The clinical effects of 1,25(OH)2D3 supplementation in HCV-positive chronic hepatopathic patients.
Material and methods.
Peripheral blood mononuclear cells were obtained by centrifugation over Ficoll-Hypaque density gradient solution. The effect of VitD3 to affect the ability of CD40L to induce tumour necrosis factor (TNF)-α, and interleukin (IL)-1b production and to up-modulate surface expression of CD40, CD80 and CD86 was evaluated in three days old monocyte. Also, the effect of VitD3 to down-regulate the co-stimulatory activity of CD40L-stimulated monocytes was studied in T lymphocytes stimulated by immobilized anti-CD3. Surface markers expression and cytokine production was evaluated by FACS. To assess proliferation, T lymphocytes were stimulated with phytohemagglutinin (PHA) in the presence or absence of vitD3 and pulsed at day 4 with 3H-thymidine for 18 hours. The effect of vitD3 on intracellular interferon (IFN)-g, tumour necrosis factor (TNF)-α production was evaluated by FACS in T lymphocytes after either phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)/Ionomicin stimulation.
Results and Conclusions.
1,25(OH)2D3 exherts modulatory effects on important immune activation pathways. These effects are dose-dependent. 1,25(OH)2D3 has immunomodulatory effects on T-lymphocytes of patients transplanted for HCV-positive liver cirrosis. These effects are similar in patients and controls. Preliminary data on 1,25(OH)2D3 supplementation in HCV-positive patients have shown encouraging results. | en |
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| language.iso | it | en |
| subject | 1,25(OH2)D3 | en |
| subject | CD40L | en |
| subject | monociti | en |
| subject | linfociti | en |
| subject | citochine | en |
| subject | immunosoppressione | en |
| subject | epatopatia | en |
| subject | HCV | en |
| subject.classification | MED/09 Medicina interna | en |
| title | Ruolo immunomodulatorio della 1,25(OH)2D3 con particolare attenzione ai pazienti affetti da epatopatia HCV-positiva | en |
| title.alternative | Immunomodulatory role of 1,25(OH)2D3 with particular interest on HCV-positive hepatopathic patients | en |
| type | Doctoral thesis | en |
| degree.name | Medicina preventiva e terapia | en |
| degree.level | Dottorato | en |
| degree.discipline | Facoltà di medicina e chirurgia | en |
| degree.grantor | Università degli studi di Roma Tor Vergata | en |
| date.dateofdefense | A.A. 2008/2009 | en |
| Appears in Collections: | Tesi di dottorato in medicina
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